Анализы пцр на вич исключают его. Анализы на вич, спид

ПЦР на ВИЧ – один из самых информативных методов молекулярно-генетического диагностирования. Этот способ помогает выявить у пациента разного рода инфекционные недуги и заболевания, которые передаются по наследству. Этот же метод диагностики применим в случае проверки биоматериала на присутствие ВИЧ – тяжелого заболевания, развивающегося на протяжении всей жизни пациента. С медицинской помощью ПЦР оказалась в числе рекомендуемых анализов, проводимых на платной основе при подозрении на вирус иммунодефицита человека. Однако достоверность исследования оправдывает себя только в 80 из 100 случаев.

ПЦР диагностика на ВИЧ расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Для исследования данного вида применяются различные типы биологических материалов. Среди них кровь, кроме этого может использоваться секреция из влагалища пациентки или семенная жидкость у мужчин.

Внимание! Слюна для ПЦР при диагностике ВИЧ не используется. Подобный подход признан неэффективным, поскольку в этом материале антитела к ВИЧ находятся в минимальной концентрации. Это же касается мочи, пота и слез.

Показанием к проведению описываемого исследования, является дважды положительный ИФА (иммуноферментный анализ). Об альтернативных назначениях речь пойдет позже.

Подробно о сути анализа

В основе анализа на ВИЧ методом ПЦР лежит возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться. Живые клетки состоят из белка и этих самых кислот, иначе говоря, из РНК и ДНК. Молекулы выступают в роли хранителей генетического кода.
При низкой концентрации вирусных частиц (ВИЧ) в биоматериале, проба включает не целые цепочки ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), а только их составляющие, называемые нуклеотидами. Анализ позволяет выявить даже незначительные остатки клеток вируса. Именно этим фактом объясняется способность ПЦР демонстрировать результат на ранних сроках – спустя несколько недель после заражения ВИЧ.

Наиболее качественных результатов от проведения полимеразной цепной реакции стоит ждать при исследовании венозной крови. Пробу расщепляют с помощью оборудования. Затем фракции подвергаются ферментной обработке. Реактивные вещества, объединившись с частицами вирусной ДНК, дублируют ее. Число таких элементов возрастает по принципу цепочки, пока их наличие (не антител) в крови пациента не станет заметно лаборантам. По точно такому же принципу не работает ни один из существующих способов диагностики.

Компоненты реакции

С помощью метода ПЦР можно заблаговременно узнать о развитии вируса в организме. Почему же его нельзя назвать популярным в области бесплатной медицины и делать повсеместно? Дело в том, что такой тест на ВИЧ весьма затратный и требует наличия следующих компонентов:

• матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты, включающая отрезок ДНК, предназначенный для амплификации;
• два праймера (для каждого цепного отрезка);
• химически активный компонент полимераза для ускорения полимеризации вирусных частиц;
• дезоксирибонуклеозидтрифосфаты;
• частицы двухвалентного магния (заряженные);
• специальный раствор для создания благоприятных условий, обеспечивающий должный уровень кислотности, солевой концентрации, количества частиц магния в жидкости.

Внимание! Чтобы защитить образец от перегрева, в материал добавляют небольшое количество вазелина, который содержит жиры и, соответственно, высокую температуру кипения.

Относительно высокий показатель точности анализа объясняется его повышенной чувствительностью, которая стимулирует реакцию на антитела к прочим вирусам.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Для объективной оценки метода в таблице ниже приведем ряд преимуществ и недостатков исследования:

Плюсы

Минусы

– достаточно высокий показатель точности (выявляет вирус в 80% случаев) – универсальность (для проведения исследования используют не только кровь, но и влагалищные выделения, сперму) – обширный спектр методики (одну пробу биологического материала можно проверить на несколько болезней) – скорость получения результата (пациент получает ответ на следующие сутки – более оперативны в этом плане экспресс-методы) – высокая чувствительность (возможна диагностика на ранних этапах развития ВИЧ, чего не скажешь об ИФА или общем анализе крови на инфекцию) – отсутствие возрастных ограничений (такой анализ крови на ВИЧ можно брать и у ребенка с момента его рождения)

– высокая цена – необходимость использования высокотехнологичного оборудования – 20 % получения ложноположительных результатов (по причине высокой чувствительности метода)

Очевидно, преимуществ методики больше. Если оценивать тип диагностики с точки зрения продуктивности дальнейшего лечения и возможности продления жизни пациенту, ПЦР – самый верный путь к успеху.

Особенности анализа

Основная особенность описываемого анализа состоит в его способности к ранней диагностики ВИЧ, на что не способны другие методы исследований. Через сколько дней после предполагаемого инфицирования можно сдавать кровь на ПЦР? Обычно этот временной промежуток составляет 10-14 дней. В течение следующих 24 часов пациент получает результат. Возможные отклонения в сроках объясняются индивидуальными условиями работы диагностических центров, клиник.

Назначение исследования

ПЦР в большинстве своем проводится в целях выявления ВИЧ (синдрома иммунодефицита человека). Однако анализ можно сдать и при подозрении на развитие заболеваний, которые передаются половым путем. Этот же метод применим и в случае диагностики наследственных болезней.

ПДР-диагностика: причины для проведения

Когда следует сдавать кровь на ПЦР? Биологический материал в большинстве случаев сдается, когда вирус иммунодефицита человека приспособился к условиям организма, простимулировал выработку антител и вызвал первые симптомы ВИЧ. Однако подобное оправдано лишь в случае истечения достаточного количества времени после заражения и предполагает проведение ИФА.

Необходимость же в ПЦР возникает по инициативе пациента, который желает оперативно диагностировать заболевание (если таковое имеет место быть). Причиной тому может быть: незащищенный половой акт, контакт с биологическим материалом инфицированного, недавнее переливание крови и пр.

Кому назначается ПЦР?

Определение инфекции ВИЧ при помощи ПЦР по рекомендации специалиста производят в следующих случаях:

• предварительное диагностирование. ПЦР безошибочно подтверждает или опровергает результат ИФА;
• иммуноблоттинг подтвердил диагноз . Иммунный блоттинг является дополнительным способом исследования СПИДа. Оба метода применяются совместно, что позволяет исключить вероятность постановки ошибочного диагноза;
• при подтвержденном ВИЧ-статусе с помощью ПЦР отслеживают эффект от проведения выбранного лечения;
• для анализа крови доноров на присутствие ВИЧ-антител;
• для определения ВИЧ-статуса у новорожденного, когда мать имеет положительный результат. ПЦР в первые дни жизни позволяет определить внутриутробное инфицирование или заражение младенца при прохождении по родовым путям. Тест проводится на 2 – 3 неделе после рождения.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где его можно сдать?

Анализ ПЦР на ВИЧ проводится в специальной лаборатории. Сам тест и трактовка результата не требует много времени: месяца и даже недели. Для взятия крови необходимо до 6 минут. В обычном случае специалисту, чтобы поставить диагноз и выдать заключение, потребуется не больше суток. Первые 8 часов происходит изучение крови, оставшееся время уходит на оформление. Результат можно будет забрать уже на следующий день после взятия пробы. Срок проведения экспресс-тестирования – 2 часа.

Внимание! Полис ОМС дает возможность прохождения теста бесплатно в государственном учреждении здравоохранения.

Почти любая коммерческая лаборатория способна провести исследование, причем, на анонимной основе. Человеку присваивают специальный номер, к которому затем привязывают результаты. Данная информация заливается на сайт учреждения в личный кабинет пользователя.

Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?

Данный способ проведения исследований является достаточно дорогим. Связано это с тем, что проводить ПЦР необходимо на новейшем медицинском аппарате, манипуляция требует от специалистов достаточного багажа знаний.

Насущный вопрос: сколько же стоит человеку сдать анализ ПЦР на ВИЧ? Для этого потребуется в районе 56-60 долларов.

Проведение анализа

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ предусматривает:

• забор крови на проведение исследование;
• дополнительный забор спермы у мужчины и половых выделений у женщины.

Внимание! В результате тест позволяет медикам определить высокую вирусную нагрузку для того, чтобы осуществлять контроль над состоянием больного.

Прочие особенности проведения этого анализа на ВИЧ, которые стоит принять во внимание:

• пару дней до теста пациенту следует снизить количество жирной пищи в рационе;
• забор крови производится на голодный желудок;
• к расщепленным биологическим материалам в особом реакторе добавляются ферменты, синтезирующие различные инфекции;
• анализ проводят в несколько этапов, т. к. деление молекул происходит в арифметической прогрессии. Специальная программа осуществляет сравнение большого количества клеточных структур для выявления ВИЧ.

Методы точной диагностики, к которым относится ПЦР, отличаются высокой стоимостью, но способны на ранних сроках выявить ВИЧ. В лечении подобных патологий самое главное – правильно и своевременно поставленный диагноз, который может улучшить качество жизни человека и ее продолжительность.

Для большинства женщин и мужчин это венерическое заболевание вызывает наибольшее опасение. По этой причине после случайной интимной связи без барьерной контрацепции, а также при частой смене половых партнеров и после хирургических операций, разумный человек испытывает определенную настороженность. Самый надежный способ внести ясность - это обратиться в клинику и сдать ПЦР анализ на ВИЧ.

Тест по крови можно использовать для определения следующих показателей:

• Опровержение/подтверждение наличия ВИЧ в латентный период (в первые недели после заражения антитела в анализах ИФА не выявляются по причине их отсутствия или слишком низкой концентрации).
• Определение генотипа ВИЧ-1, ВИЧ-2.
• Выявление статуса у детей, которые родились от матерей-носителей (антитела к ВИЧ длительное время выявляются у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных женщин. Определение ДНК вируса у детей желательно проводить в возрасте до 48 часов жизни, 1-2 месяца, 3-6 месяцев).
• Ложноотрицательные, ложноположительные и сомнительные результаты ИФА тестов.
• Диагностика количества ВИЧ и контроль за изменением вирусной нагрузки в динамике (в случае уже установленного диагноза СПИД анализ методом ПЦР используется для прогноза, динамического наблюдения и мониторинга проводимой терапии).

Цена анализа ПЦР на ВИЧ

Методы	Тип ПЦР анализа	Цена
ДНК ВИЧ 1 типа	качественный	2 750
РНК ВИЧ 1 типа в плазме	количественный	8 850
РНК ВИЧ, определение резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы и обратной транскриптазы (заказывается вместе с "РНК вируса ВИЧ в плазме")	-	16 550
РНК ВИЧ, определение резистентности ВИЧ к ингибиторам интегразы (заказывается вместе с "РНК вируса ВИЧ в плазме")	-	16 950
РНК/ДНК HIV-1, определение тропизма ВИЧ	-	16 950
Мультипрайм исследование
РНК гепатита С + ДНК гепатита В + РНК ВИЧ 1 и 2 типа (ультрачувствительный метод)	качественный	3 800

АНАЛИЗ ПЦР НА ВИЧ - КОГДА СДАЮТ, ЗАЧЕМ И В КАКИЕ СРОКИ

1. ДНК ВИЧ. Диагностика ДНК вируса иммунодефицита человека возможно использовать для раннего определения возможного инфицирования после случая повышенного риска (анализы крови сдаются в сроки, начиная через 10-й день после потенциального инфицирования). Однако для полного исключения инфекции, необходимо в последующем проведение повторного исследования и ИФА диагностики в сроки 4 и 12 недель.
   Результаты анализа: ДНК ВИЧ (качественный анализ) - "не обнаружено" или "обнаружено". В последнем случае требуются повторные дополнительные исследования для подтверждения ВИЧ-инфекции. При отрицательном результате, но высоком риске инфицирования, требуется повторное обследование - пересдача крови методом ПЦР или ИФА спустя некоторое время.
2. РНК ВИЧ. Определение РНК ВИЧ методом ПЦР количественный (так называемая "вирусная нагрузка") - один из показателей для оценки прогноза течения ВИЧ-инфекции и самый ранний показатель эффективности противовирусной терапии. Тест показан для мониторинга течения болезни, решения вопроса о начале терапии, оценки её эффективности.
   Исследование РНК ВИЧ методом ПЦР возможно использовать у взрослых при ранней достоверной диагностики возможного инфицирования после эпизода высокого риска (примерно через 7-10 дней после вероятного инфицирования). Присутствие высокого титра РНК ВИЧ в отсутствие антител позволяет диагностировать острую ВИЧ-инфекцию. Однако для уточнения диагноза необходимо проведение повторного исследования и ИФА диагностики в сроки через 1 и 3 месяца.
   Сдача ПЦР РНК ВИЧ у беременных с этой инфекцией за 3-4 недели до предполагаемого срока родов показана для решения вопроса о методе родоразрешения (через естественные родовые пути или путём кесарева сечения).
   Результаты анализа: РНК ВИЧ HIV 1 типа (количественный анализ) - "не обнаружено" (это в норме).
3. Резистентность ВИЧ. Анализ на определение резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы и обратной транскриптазы показан ВИЧ-инфицированным при неэффективности проводимой терапии, а также в период острой инфекции перед началом противовирусного лечения. Исследование позволяет определить резистентность ВИЧ к лекартсвенным препаратам. По результатам проведенного анализа инфекционист узнаёт о наличии мутаций устойчивости к ингибиторам протеазы, нуклеозидным и ненуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы, а также информацию по каждой аминокислотной позиции, ассоциированной с мутацией лекарственной устойчивости.
4. Мультипрайм комплексная диагностика: качественное определение РНК вируса гепатита С / ДНК вируса гепатита В / РНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 и 2 типа (ультрачувствительный метод). Анализ позволяет проводить диагностику ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов С и В на ранних сроках. Исследование показано для раннего выявления вирусных гепатитов В и С, ВИЧ 1/2 типа у лиц из группы риска. Выявление ДНК или РНК вирусов свидетельствует об инфицировании.

Сроки готовности данных анализов крови - от 3 до 7 календарных дней. Сдать качественный и количественный анализ ПЦР для диагностики ВИЧ инфекции в Москве можно в нашем медицинском центре. Взятие крови ежедневно, с 10-00, в том числе на

Согласно статистике ВОЗ, за 40 последних лет 25 млн человек умерли от СПИДа. Урон от этой инфекции колоссален. Больше всего зараженных оказалось в странах Африки, откуда и пошла эта инфекция. При ВИЧ становится особо актуальной диагностика заболевания. Правда, средств для лечения ВИЧ еще не создано, но рано начатая терапия может удлинить срок жизни пациента и улучшить ее качество.

Диагностика инфекции ВИЧ

ВИЧ-инфекция определяется на разных этапах следующими методами:

• ИФА - иммуноферментный анализ.
• Вестерн-блот.
• ПЦР - полимеразная цепная реакция.
• Экспресс-тесты.

Метод ПЦР был разработан американским биохимиком Кэри Муллисом, который получил за это в 1983 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод в медицине при диагностике всех инфекций считается ведущим в силу своей точности и информативности. ВИЧ в этом плане не исключение.

Суть анализа

Любая живая клетка содержит РНК и ДНК. Эти нуклеиновые кислоты способны к самокопированию и самовоспроизведению. Для каждой инфекции фрагменты ДНК уникальны. В биологических жидкостях эти обломки нуклеиновых кислот циркулируют. Они улавливаются и распознаются специальной аппаратурой - реактором. Это и есть основа метода. Лаборант ведет подсчет этих фрагментов. У ретровируса ВИЧ отслеживают РНК. Даже при единичных копиях вирусных частиц ПЦР может их обнаружить и посчитать.

В качестве исследуемой жидкости чаще всего используется венозная кровь. Специальные компоненты метода вступают в связь с частицами вируса и делают их определяемыми, потому что происходит многократное увеличение найденных фрагментов.

В случае с ВИЧ результат наличия вируса можно получить задолго до того, как появится клиника. Поэтому в силу своей высокой чувствительности ПЦР имеет такое высокое диагностическое значение. Огромный плюс ПЦР заключается в универсальности метода. Инкубационный период инфекции для ПЦР не преграда.

Стоимость исследования

Метод ПЦР - достаточно дорогой. В этом заключается один из его больших минусов. Для его проведения нужна новейшая аппаратура и высокая квалификация врача-лаборанта. В силу сказанного ПЦР-диагностика не выполняется в небольших населенных пунктах. Сдать анализ можно только в специализированных крупных клиниках.

Стоимость определения ДНК ВИЧ в клиниках Москвы от 2 800 рублей, выяснение с помощью ПЦР вирусной нагрузки (РНК вируса в плазме) - от 8 800 рублей, а резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы - от 16 500 рублей. Как видим, цены достаточно высокие. ПЦР можно провести бесплатно в государственных поликлиниках по полису ОМС. Важно, что процедуру можно сделать анонимно. В регистратуре пациент получает номер, по которому он сможет узнать результат. В современных медцентрах имеются личные кабинеты клиентов, куда эти данные будут внесены.

Цели исследования

ПЦР-диагностику на ВИЧ назначают в таких случаях:

• Выявление инфекции у ребенка, рожденного от больной матери или носительницы, чтобы определить внутриутробное инфицирование.
• Если ИФА дал сомнительные результаты (ПЦР на ВИЧ помогает в этом случае поставить окончательный диагноз).
• Для выявления количественного содержания вируса в организме.
• При положительном иммуноблотинге - они с ПЦР дополняют друг друга.
• Тестирование доноров.
• Для ранней диагностики ВИЧ.
• Для определения эффективности и резистентности к АРВТ.

Преимущество указанного анализа и в том, что ПЦР на ВИЧ можно проводить даже детям до года.

Исследование чаще выполняют не для первичной диагностики, а уже в процессе лечения. Первичная диагностика - это серологические исследования (при них определяют уровень антител к ВИЧ). При ложноположительном результате его повторяют - это может быть при низкой вирусной нагрузке.

ПЦР диагностирует ВИЧ, когда еще нет к нему антител. Метод ИФА в этом случае не даст ответа.

А ПЦР на ВИЧ будет уже положительным. Но симптомы данного периода ВИЧ неспецифичны. Пациент сначала долго и безуспешно лечится по поводу ОРВИ у терапевта. Следует иметь в виду, что диагноз ВИЧ только на основании ПЦР не ставится, необходимо прохождение и других комплексных тестов. Метод ПЦР служит чаще вспомогательным для сложных случаев.

Подготовка к анализу

Перед тем как сдать ПЦР на ВИЧ, за 2 дня до анализа нужно не употреблять жирную пищу, алкоголь. Также лучше психически и физически не напрягаться. Если пациенту назначен курс иммуностимуляции, его прекращают за 2 недели до анализа.

Кровь лучше сдавать в утренние часы. Исследовать можно и другие биологические жидкости организма (сперму, секрет вагины), но лучшим материалом является кровь. Слюну, пот, мочу и слезы не используют, так как содержание вируса в них минимально.

Плюсы ПЦР при ВИЧ

Достоинствами метода являются крайне малая вероятность ложноположительного результата, универсальность реакции для любых биологических жидкостей организма. Анализ имеет широкий спектр:

• Один забор крови можно использовать для выявления разных инфекций.
• Методика относится к срочным, результат бывает готов уже на следующий день.
• Достоверность составляет от 85 до 98%.
• Наличие ВИЧ можно определить через 10-14 дней после заражения (антител при этом сроке еще нет).
• Нет возрастных ограничений, проводить можно сразу с момента рождения.

Минусы метода

Недостатки ПЦР заключаются в следующем:

• Дороговизна анализа.
• Необходимо сложное медицинское оборудование.
• Требуется высокая квалификация лаборанта и врача, берущего анализ.
• Реакция высокочувствительна, поэтому погрешность может составить 20%.
• Может получиться ложноположительный результат, если у пациента есть аутоиммунные процессы, онкология, хронические инфекции.
• Необходима особая чистота помещения лаборатории, потому что вирус может попасть в анализ из воздуха. Тогда результат будет неправильным.

Для лабораторий, в которых проводится ПЦР, для улучшения качества диагностики разработаны специальные жесткие меры по системе СанПиНа на внутренний контроль. Кроме того, должны быть соблюдены все правила работы при такой методике:

• Требуется строго следить на информацией на пробирках.
• Перед забором крови вновь посмотреть и удостовериться в назначении анализа.
• Медсестра должна сделать правильную маркировку пробирок.
• Врач-лаборант должен правильно провести все манипуляции с биоматериалом, чтобы не допустить перекрестное загрязнение.
• Тест-система должна быть отличного качества.

Только при соблюдении всех этих условий погрешность в ответе может составить всего около 2% эпизодов.

Длительность анализа

Многие интересуются, через сколько ПЦР на ВИЧ будет готов. Диагностирование длится не больше 8 часов. Ответ пациент может получить уже на следующий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Достоверность ПЦР

Несмотря на массу преимуществ, ПЦР не считается идеальным методом диагностирования. К нему обращаются в случае необходимости получения скрининговых тестов на наличие ВИЧ в организме.

Когда берут кровь на анализ?

Через сколько сдавать ПЦР на ВИЧ? Достоверный результат можно получить уже при взятии крови через 4-4 дней после предполагаемого инфицирования. Через 2 недели достоверность на ВИЧ составит 98%, а при сроке 5 дней - 80%. Наличие при ПЦР на результата будет достоверным, но для абсолютно точного результата проводят и ИФА.

Анализ ИФА будет результативным только при наличии антител к вирусу, это время может занимать от 1-3 месяцев до полугода. Так как ИФА дает вероятность выше (98%-99,9%), ПЦР нельзя назвать 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции. Но зато это единственная методика, при которой не нужно ждать появления антител.

При ВИЧ методом ПЦР можно получить сведения об эффективности АРВТ, о стадии заболевания ВИЧ и количестве ВН (количественная оценка нахождения ВИЧ в организме). Это будет говорить о тяжести и степени изменений.

Сдать анализы на ПЦР при ВИЧ нужно и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не указывает на достоверность ВИЧ-инфицирования клинически.

Сдают анализ не только при заражении и случайной половой связи. Другие поводы:

• Планирование беременности.
• Предстоящая операция.
• Случайная половая связь.
• Некоторые профессии требуют сдачи этого анализа для допуска на работу (педагоги, врачи и другой медицинский персонал).
• Заключенные.
• Больные ТБ.
• Работники МЧС и полиции.
• Вернувшиеся после отпуска из экзотических стран (при желании удостовериться, что нет инфицирования).
• Проститутки.
• Иностранные студенты.
• Наркоманы.

Также к сдаче анализа на ВИЧ может вынудить определенная симптоматика у пациента:

• Резкая потеря веса.
• Диарея, длящаяся больше 3 недель.
• Беспричинное повышение температуры в течение длительного времени.
• Увеличение лимфоузлов.
• Невыясненная причина пневмонии, кандидоза и пр.

Расшифровка анализа - прерогатива лечащего врача, а не лаборанта.

ПЦР или ИФА, что лучше?

При РНК вируса выявляется и качественно, и количественно. Этот анализ четко идентифицирует конкретный патоген даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых. Биологический материал можно использовать даже в засохшем виде. Минус же в высокой чувствительности ПЦР, когда ложноположительный результат может дать и присутствие на инструментах или пробирке даже мизерного количества постороннего ДНК.

Задача и возможность ИФА - определение наличия антител к ретровирусу. Хотя его точность 99%, на ранних стадиях он неприменим.

Качественный анализ на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ определяет присутствие вируса в организме. Результаты в этом случае будут выглядеть следующим образом: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но данное исследование не даст сведений о количестве ретровируса. Такой качественный анализ нецелесообразен тогда, когда уже выявлена ВИЧ-инфекция в организме другими способами.

Контролировать результативность лечения качественным ПЦР невозможно.

Количественный анализ на ВИЧ

Проводится уже только ВИЧ-инфицированным с целью подсчета количества копий РНК вируса в биопрепарате.

Цель такого исследования - мониторинг проводимого лечения и выявление резистентности вируса к нему. Противовирусная терапия в таких вычислениях не назначается врачом вслепую, поэтому будет являться более эффективной. Количественный ПЦР на ВИЧ-инфекцию делают гораздо чаще. Отображается этот анализ копией/мл крови.

Какие результаты могут быть выданы:

• РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл). Нет достоверности диагноза.
• От 20 - до 10 в 6 степени копий/мл - диагноз достоверный.
• Более чем 10 в 6 степени копий/мл - большая ВН.

Лаборатории могут выполнять анализ ПЦР на ВИЧ в режиме Real-time. Это подразумевает наблюдение и численную оценку накапливания продуктов ПЦР при автоматической фиксации результатов.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод молекулярной генетики, который позволяет анализировать любую короткую последовательность ДНК (или РНК) даже в образцах, содержащих только мельчайшие количества ДНК или РНК, тем самым определив наличие/отсутствие патогенного возбудителя (определить, например есть ли в человеке вирус ВИЧ или гепатита Б или микобактерии туберкулёза). ПЦР используется для воспроизведения/умножения/клонирования (амплификации) выбранных участков ДНК или РНК для анализа.

Метод ПЦР настолько прост, что его может поставить даже школьник)

Раньше амплификация ДНК включала клонирование сегментов, представляющих интерес, в векторы для экспрессии в бактериях и занимала недели. Но теперь, когда ПЦР делается в пробирках, требуется всего несколько часов . ПЦР является высокоэффективной , так что из ДНК может быть сделано огромное количество копий.

Последовательность ДНК и соответствие нуклеотидов.

Да не оскудеет рука дающего

Проект «СПИД.ВИЧ.ЗППП.» — некоммерческий, созданный добровольцами-экспертами в области ВИЧ/СПИДа за счет своих собственных средств, чтобы донести правду людям и быть чистыми перед своей профессиональной совестью. Будем благодарны за любую помощь проекту. Да воздастся Вам в тысячи крат: ПОЖЕРТВОВАТЬ .

Более того, ПЦР использует те же молекулы, которые природа использует для копирования ДНК:

• Два «праймера», коротких одноцепочечных последовательностей ДНК, которые синтезируются так, чтобы соответствовать началу и концу растяжения ДНК, подлежащей копированию.
• Фермент, называемый полимеразой, который перемещается вдоль сегмента ДНК, считывает его код и собирает копию.
• Куча блоков ДНК, которые необходимо сделать этой полимеразе.

То есть ПЦР — это такая техника при которой частицы ДНК (иногда РНК) умножаются в определенном растворе или на специальной поверхности, где они могут быть депонированы.

ПЦР — это метод, с помощью которого учёные могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

задача ПЦР как метода — умножить (амплифицировать), сделать как можно больше их копий, чтобы можно было идентифицировать кому они могут принадлежать (определенному человеку, животному или патогенному организму), даже если есть только следы наличия ДНК/РНК.

Однако ПЦР-амплификация является лишь частью диагностического теста. После проведения амплификации амплифицированные сегменты необходимо сравнить с другими нуклеотидными сегментами , но уже из известного источника (например, конкретного человека, животного или патогенного организма). Это сравнение уникальных сегментов часто выполняется путем размещения нуклеотидных последовательностей, сгенерированных ПЦР, рядом с известными нуклеотидными последовательностями от людей, патогенов или других источников в специальном геле.

Когда электрический ток проходит через гель, то различные нуклеотидные последовательности образуют полосы, которые напоминают «лестницу» в соответствии с их электрическим зарядом и молекулярным размером. Это называется гель-электрофорез. Они мигрируют на одни и те же уровни в геле, показывая идентичность нуклеотидных последовательностей. Этот метод является одним из самых популярных последних этапов ПЦР-тестов.

Как ПЦР работает?

В 1983 году Кари Муллис разработал основные этапы по амплификации ДНК-последовательностей. Он и Майкл Смит были удостоены Нобелевской премии за создание ПЦР в 1993 году.

ПЦР проводится в одной пробирке с соответствующими химическими веществами и при определенной температуре нагревания.

Необходимы следующие реагенты или химикаты:

• Образец, содержащий нуклеотидную последовательность (из крови, волос, гноя, кожи и т. д.).
• ДНК-праймеры: короткая одноцепочечная ДНК, которая присоединена к нуклеотидным последовательностям, которая способствует синтезу комплементарной цепи нуклеотидов.
• ДНК-полимераза: фермент, который, когда ДНК связывается с праймером, спускается по фрагменту ДНК с добавлением структурных блоков ДНК для образования комплементарных пар оснований и, таким образом, синтезирует комплементарную нуклеотидную цепь ДНК (введение термостойкой ДНК-полимеразы, Taq-полимеразы, полученной из термостойких бактерий, заметно улучшает способность к ПЦР).
• Большой избыток структурных блоков ДНК, называемых нуклеотидами (аденин, тимидин, цитозин и гуанин, сокращенные как: A, T, C и G соответственно) в растворе. Когда эти блоки соединены вместе, они образуют нуклеотидную последовательность или одну нить ДНК. Когда эти строительные блоки связывают свой комплементарный строительный блок слабыми водородными связями (например, A будет связываться только с T и G только с C) образуется комплементарная нуклеотидная последовательность ДНК, которая связана с исходной одноцепочечной ДНК. Когда связывание завершается, комплементарная ДНК с двойной цепью образуется в определенной последовательности.

Кари Муллис очень интересный, прикольный дядечка, посмотрите как он интересно рассказывает, как он придумал ПЦР:

Он верит в астрологию, но не верит, что ВИЧ вызывает СПИД.)

Затем полимеразно-цепная реакция начинается с сегмента ДНК из образца, который помещается в пробирку с указанными выше реагентами. Раствор нагревают до 94°С. Нагревание разрушает водородные связи, которые позволяют образовывать комплементарные цепи ДНК, поэтому в смеси существуют только одиночные нити (это называется денатурацией двухцепочечной ДНК).

Смеси дают остыть до 54°C. При этой температуре ДНК-праймеры и ДНК-полимераза связываются с отдельной одноцепочечной ДНК (это называется отжигом ДНК). Поскольку строительных блоки в избытке (высокая концентрация) в смеси, полимераза использует их для создания новых комплементарных нитей ДНК (называемых расширением ДНК), и этот процесс происходит быстрее при 72°C. Этот процесс создает новую двухцепочечную молекулу ДНК из каждой из одиночных нитей исходной молекулы.

Этот цикл повторяется примерно 40 раз в машине, называемой термическим циклером (термосайклером), который автоматически повторяет циклы нагрева-охлаждения, при этом количество каждой последовательности ДНК удваивается каждый раз, когда цикл нагрева-охлаждения завершается. То, что изначально было одним коротким сегментом ДНК, можно было увеличить до примерно 100 миллиардов копий после 40 циклов удвоения.

Когда необходим тест на ПЦР?

Тест на ПЦР является основой для ряда тестов, которые могут отвечать на многие различные медицинские вопросы, которые помогают врачам диагностировать и лечить пациентов. Например, тесты ПЦР могут обнаруживать и идентифицировать патогенные организмы у пациентов, особенно тех, которые трудно культивировать (например, ВИЧ и другие вирусы и некоторые грибы ).

Одни врачи назначают ПЦР-тесты, чтобы помочь диагностировать генетические заболевания , в то время как другие врачи используют ПЦР для обнаружения биологических родственных отношений, таких как идентификация родителей детей . ПЦР-тесты также используются для идентификации и характеристики генетических мутаций и перегруппировок, обнаруженных при определенных раковых заболеваниях .

Тем не менее, ПЦР-тесты были модифицированы и внедрены во многие аспекты научных исследований, включая эволюционную биологию, генетическую отпечатку пальцев, судебно-медицинские исследования и многие другие.

Что такое ОТ-ПЦР?

Обратно-транскриптазный ПЦР (RT-PCR) — это тест на ПЦР, который предназначен для обнаружения и измерения количества РНК. Хотя первоначальные тесты ПЦР амплифицировали ДНК, многие вирусы и другие биологические компоненты (например, митохондрии) используют РНК в качестве своего генетического материала. RT-PCR отличается от обычной ПЦР сначала взятием РНК и превращением нити РНК в нить ДНК. Это делается по существу тем же самым методом для ПЦР, описанным выше, за исключением использования фермента, называемого обратной транскриптазой, вместо ДНК-полимеразы.

Обратная транскриптаза позволяет перевести одну нить РНК в комплементарную цепь ДНК. Как только эта реакция происходит, рутинный метод ПЦР можно затем использовать для амплификации ДНК. RT-PCR используется для обнаружения и изучения многих РНК-вирусов. RT-PCR не следует путать с другим вариантом ПЦР, называемым ПЦР в реальном времени (реал-тайм).

ПЦР в реальном времени представляет собой вариацию ПЦР, которая позволяет анализировать амплифицированную ДНК в течение обычных 40 циклов процедуры. Хотя процедура аналогична обычной ПЦР с циклированием, ПЦР реального времени использует флуоресцентные красители, прикрепленные к некоторым из строительных блоков или небольших нуклеотидных нитей. В зависимости от используемого метода флуоресценция возникает, когда образуются амплифицированные нити ДНК. Количество флуоресценции можно измерить на протяжении 40 циклов и позволяет исследователям измерять определенные продукты и их количества во время циклов амплификации.

Это часто позволяет исследователям или техническим специалистам пропускать гель-электрофорез или другие вторичные процедуры, необходимые для анализа продуктов ПЦР, тем самым обеспечивая более быстрые результаты. ПЦР в реальном времени и RT-PCR являются вариациями или модификациями исходного теста ПЦР. Тем не менее, существует еще много вариантов (не менее 25), которые существуют и используются для решения конкретных проблем. Все они имеют разные названия, такие как сборка ПЦР, ПЦР с горячим началом, мультиплексная ПЦР, твердотельная ПЦР и многие другие.

Что такое ПЦР анализ на ВИЧ?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — метод умножения генетического материала вируса, анализ, который определяет генетический материал вируса — РНК или ДНК ВИЧ.

Если вирус содержится в минимальном значении, то в результате реакции это количество многократно увеличивается. Поэтому ПЦР имеет высокое диагностическое значение.

Обычно этот тест используется для определения ВИЧ в донорской крови или для раннего определения наличия ВИЧ в организме до выработки специфических антител к ВИЧ. Специфические антитела определяют обычные тесты на ВИЧ (ИФА), но только через 1-3, редко 12 месяцев после заражения. А с помощью ПЦР можно дать достаточно точный ответ через 14 дней с достоверностью 98% и даже через 5 дней, но тогда достоверность будет 80%. ПЦР на ВИЧ — это дорогой и более трудоемкий анализ, чем ИФА, поэтому его используют не всем подряд , а только по особым показаниям (доноры, пострадавшие от медицинской аварии с ВИЧ-инфицированным) или платно.

Качественный ПЦР анализ на ВИЧ — определяет есть вирус ВИЧ-1/ВИЧ-2 или его нет, но он не определяет количество копий вируса (для определения количества используется количественный ПЦР). Качественный ПЦР НЕ делают тем у кого известен диагноз «ВИЧ-инфекция». Его делают только тем, у кого пока неизвестно — инфицирован он ВИЧ или нет.

Это метод определения комплиментарного участка ДНК в геноме клетки лимфоцита пораженного ВИЧ. Т.е. определяется не сам вирус, а материал, который вирус встраивает в клетку. В ядре клетки уже будет храниться его ДНК из которой он потом будет считываться и размножаться (копировать самого себя).

Количественный ПЦР анализ на ВИЧ

Количественный ПЦР анализ на РНК ВИЧ — определяет количество копий РНК вируса в крови (для определения вируса в клетках используют ПЦР ДНК, например у детей). Делается только у ВИЧ-инфицированных , для контроля лечения, определения выраженности процесса развития болезни, эффективности лечения.

Через сколько времени после заражения можно обнаружить ВИЧ с помощью метода ПЦР?

Через сколько дней можно сдавать ПЦР на ВИЧ после контакта с ВИЧ положительным партнёром?

ВИЧ с помощью ПЦР можно обнаружить через 4-14 дней после заражения. Отрицательный результат ПЦР на ВИЧ достоверен после 14 дней после рискованного контакта, но по действующим нормативам всё равно требуется обследование с помощью .

Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например, для оценки эффективности терапии.

ДНК - в мононуклеарных клетках, например, для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА.

И тот и другой тест могут быть и количественными, и качественными.

И тот, и другой можно в особых случаях применить диагностики, но с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы, т.е. по назначению врача.

Может ли ПЦР на ВИЧ быть ложноположительным, причины?

Если всё сделано правильно : медсестра не перепутала пробирки, посмотрела паспорт, прежде, чем делать забор крови, правильно промаркировала пробирку, правильно выписала направление и т.д., а специалист лаборатории (обычно это врач-лаборант) сделал всё согласно инструкции, им были соблюдены все требования лабораторного регламента (например, правильно «расскапал» биоматериал, без перекрестной контаминации (загрязнения) и т.д.) и была использована качественная тест-система, ТО ПЦР ложноположительным быть МОЖЕТ только в 2% случаях (это связано с чувствительностью используемых тест-систем) .

Но если были допущены ошибки со стороны персонала медицинского учреждения, ТО ПЦР может быть ложноположительным, более чем в 2% случаев.

Как сдается ПЦР на ВИЧ?

Для исследования на ВИЧ методом ПЦР сдаётся кровь из вены, желательно (но необязательно) утром натощак.

Где можно сдать анализы на ПЦР ВИЧ?

Для этого нужно ввести в поиск Вашего браузера «сдать пцр вич» и добавить в запрос Ваш населенный пункт и Вы увидите организации, которые занимаются у Вас исследованиями на ПЦР.

Например,

Сколько стоит анализ на ВИЧ методом ПЦР?

Около 1,5-3 тыс. руб. в зависимости от региона.

Какова достоверность результатов ПЦР анализа на ВИЧ?

Через 14 дней после заражения достоверность ПЦР на ВИЧ составляет 100%, с 4-5 дня — достоверность 80%.

Сколько времени делается анализ ПЦР на ВИЧ?

Технически 4-6 часов , но в реальности зависит от организации работы лаборатории и обычно результат выдается через 2-3 дня.

ПЦР на ВИЧ у новорожденного ребенка

Так как у ребёнка до 1,5 лет рожденного от ВИЧ+ матери сохраняются её антитела против ВИЧ, то определить заражен ВИЧ ребенок или нет с помощью ИФА невозможно. В такой ситуации используется ПЦР:

• Если у ребенка возрастом 1 мес с помощью ПЦР обнаружили вирус, значит он заразился.
• Если у ребенка в 1-2 месяца и 4-6 месяцев ПЦР отрицательная, то при условии, что мать не кормила его своим грудным молоком — ребёнок здоров.

В чём разница между ПЦР и ИФА?

ПЦР определяет сам вирус, а ИФА реакцию (в виде антител) организма на вирус.

ПЦР быстрее определяет наличие вируса, чем ИФА.

Новый алгоритм определения ВИЧ.

Что нас дурачат ВИЧ/СПИДом уже 30 лет, это медицинский факт, который давно уже не нуждается ни в каких доказательствах. Я никого не хочу обижать, но правда такова, что в настоящий момент, имея перед собой всю имеющуюся информацию об альтернативной точке зрения, то есть представленную ВИЧ-диссидентами, просто невозможно продолжать и далее наивно верить в искусственно созданную и навязанную с помощью циничной и лживой пропаганды ВИЧ/СПИД-теорию.

Если вы высказывали своё недоумение по поводу того, что диагностические тесты на ВИЧ определяют не сам вирус, а только антитела к нему, причём это относится не только к иммуноферментному анализу, но и к считающемуся более точным иммунному блотингу, то наверняка потом слышали уверения врачей или неких осведомлённых людей о том, что вот есть метод полимеразной цепной реакции, который не имеет отношения к антителам, а выявляет непосредственно сам вирус.
Слышали о методе ПЦР-диагностики, и в частности ВИЧ-инфекции? Наверняка. А пробовали хоть немного вникнуть и разобраться? Нет? Итак ясно, что нас дурачат? Хорошо. Но сейчас я покажу это наглядно, на пальцах...

Да, нас действительно нагло и цинично дурачат, когда заверяют, что ПЦР-тест на ВИЧ определяет наличие самого вируса или его концентрацию в крови, то есть вирусную нагрузку. И сразу скажу, что в этом отношении метод ПЦР не только ничем не отличается от ИФА и ИБ, но можно сказать прямо основан на точно таком же принципе.
Что это значит? Напомню, что диагностические ВИЧ-тесты ИФА и Иммуноблот основаны на реакции антител в исследуемом образце с помещёнными в сам тест антигенами вируса. Что там в тест-системах в качестве этих ВИЧ-белков - одному Богу известно, и то наверное далеко не всё. Соответственно, совершенно непонятно, какие антитела вступают в реакцию с этими якобы ВИЧ-белками, в результате чего приводится список в 62 пункта о заболеваниях и состояниях, вызывающих ложноположительную реакцию.

Что лежит в основе метода полимеразной цепной реакции, и каким образом происходит диагностирование на наличие инфекционных заболеваний? В случае с гепатитами и ВИЧ исследуется кровь пациента. Чтобы установить присутствие конкретного возбудителя заболевания в исследуемом образце крови, для ПЦР-тестирования используется праймер, то есть фрагмент ДНК самого возбудителя, комплементарный к специфическому участку его ДНК, то есть в сущности праймер присоединяется к участку ДНК точно так же, как соединяются между собой участки двойной спирали ДНК.
Улавливаете? Берётся ваша кровь, потом к ней добавляется нечто, что якобы несомненно является уникальной частью генома ВИЧ-вируса, добавляются другие необходимые ингредиенты, потом раз тридцать всё это то нагревается, то охлаждается, и в результате - вуаля! вы ВИЧ-положительны! ваша вирусная нагрузка 3 миллиона! срочно начинайте приём терапии!

Но подождите. Вы разве не видите, как с самого начала вас одурачили?
Вас уверяли, что метод ПЦР выявляет сам вирус. Но это абсолютная ложь! Метод ПЦР в этом отношении ничем не отличается от ИФА и ИБ! Как там под видом ВИЧ-антигенов в тест-системах используется неизвестно что, так и в ПЦР-тестах под видом праймеров, выдаваемых за часть ДНК самого ВИЧ, точно так же используется совершенно неизвестно какая субстанция. Вы же понимаете, что если ВИЧ не существует, то не может быть и речи ни о каком ДНК ВИЧ, или РНК ВИЧ, или об антителах к ВИЧ, в частности материнских, которыми нам трахают мозги, рассказывая, что они есть у всех детей от ВИЧ-положительных матерей, и сами собой исчезают на втором году жизни...

Вот так.
- Метод ПЦР выявляет сам вирус ВИЧ, тут не может быть никаких ошибок и сомнений! И этот точнейший метод показывает вирусную нагрузку, что очень важно для наблюдения динамики заболевания и его лечения!
- Ну-ну.. Сам вирус говоришь? А что там используется в качестве праймера? Тот же самый вирус? Тот самый, который Монтанье и Галло открыли 30 лет назад? Правда они его нашли? Правда очистили? Правда сфотографировали? Правда доказали, что он для репликации/воспроизводства использует Т-лимфоциты, в результате чего их общая численность истощается и наступает опасный иммунодефицит? Это всё правда?

И в сущности метод ПЦР в спидологии применяется не столько благодаря его изобретателю Кэри Муллису (скорее даже вопреки его мнению!), сколько благодаря Монтанье и Галло, которые высосали из пальца ВИЧ, и ДНК-праймеры которого используются при ПЦР-диагностике ВИЧ...

Так что вот так вот. Если вам сказали, что по результатам ПЦР-тестирования вы ВИЧ-положительны, и у вас высокая вирусная нагрузка, или речь идёт о вашем ребёнке - не волнуйтесь ни секунды! вас нагло обманывают! Сам изобретатель метода полимеразной цепной реакции, микробиолог Кэри Муллис, является ВИЧ-диссидентом, и он категорически против использования ПЦР в ВИЧ-диагностике, потому как хорошо понимает, что в случае с несуществующим ВИЧ-вирусом это просто наглый циничный обман...

Ещё момент. Вы слышали про неопределяемую вирусную нагрузку? Дело в том, что далеко не у всех ВИЧ-положительных при тестировании на количество вируса в крови выходит некий результат, который в зависимости от величины считается низкой либо высокой вирусной нагрузкой. Если бы таких людей было совсем мало, о них бы вообще не говорили. Но дело в том, что их видимо очень много, и поэтому и говорится о неопределяемой вирусной нагрузке при ВИЧ-инфекции. Я не буду упоминать про пиар терапии, которая якобы снижает ВН до неопределяемой. Нет, в том и дело, что без всякой терапии у очень многих людей она не определяется. Никогда.
То есть, пациенту поставлен диагноз ВИЧ-инфекция, но с помощью знаменитого сверхчувствительного космически точного метода ПЦР-диагностики в его организме невозможно найти ВИЧ-вирус. Как же так?

И тогда нам говорят, что метод конечно уникальнейший, но современные технические средства таки накладывают ограничения, и саааамые маааалые коооолиииичестваааа виииируууссааа не мооогууут быть обнаружены при ПЦР-диагностике.

То есть, ВИЧ у пациента несомненно есть. Вирус неизлечим, неистребим, хитёр, коварен, злокознен, чрезвычайно умён и изобретателен. И даже суперволшебный метод ПЦР не в состоянии обнаружить, где там хитрющий вирус прячется от учёных и врачей.
Получается, что с одной стороны нам рассказывают, какой чудесный и высокоточный метод ПЦР, он де по одной молекуле может угадать всего слона и даже кита - а с другой стороны потувши очи долу нам невнятно мямлят про неопределяемую вирусную нагрузку у тысяч пациентов, которые десятки лет живут с диагнозом ВИЧ-инфекция и не принимают антиретровирусное лечение.

Такие дела. Дурачат нас, как хотят. А вы не будьте непугаными идиотами. Не верьте на слово никаким врачам и учёным. Они вам трижды по семь коробов наговорят про космическую точность ПЦР-тестов, но всего одно замечание об используемых при этом ВИЧ-праймерах в момент и вдребезги разбивают всю великолепную картину. Потому что смеха ради можно сказать, что как Галло запатентовал первые ВИЧ-тесты, когда открыл фальшивый ВИЧ-вирус, точно так же он мог бы запатентовать и ВИЧ-праймеры для ПЦР-диагностики ВИЧ-инфекции, потому что праймеры в сущности то же самое, что и антигены ВИЧ - некие специфичные, присущие только этому вирусу биологические субстанции (фрагменты генома или специфические белки)...